破骨细胞建模方法的探索
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1.右江民族医学院免疫学专业在读研究生;2.右江民族医学院基础医学院组织胚胎学教研室

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国家自然科学基金资助项目(81560362)通讯作者:解继胜(1968-),男,硕士,教授,主要从事骨转换、骨代谢异常与骨质疏松疾病的研究。第一作者:杨一秋(1991-),女,在读硕士,主要从事骨转换、骨代谢异常与骨质疏松疾病的研究。


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    目的:探索RAW264.7细胞向破骨细胞分化的最佳条件,为后续的实验研究提供一个可靠的破骨细胞建模方式。方法:将RAW264.7细胞以2x104个每孔、3x103个每孔分别接种到6孔板、24孔板中,待贴壁24小时候后更换为含20ng/mL的巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、50 ng/mL的核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的诱导液诱导培养,每隔2天换液一次,待镜下观察到较多破骨细胞时进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并利用实时荧光定量PCR检测活化T-细胞核因子1(NFATc1)、TRAP、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的mRNA表达水平。结果:经过诱导培养3天时破骨细胞开始聚集生长,出现多个核,但整体阳性破骨细胞不是太多,待诱导至4-6天时,可见到较大面积的破骨细胞、细胞核增多达数十个、细胞质也非常丰富;与对照组相比,诱导组NFATc1、TRAP、MMP-9的mRNA表达水平上调。 结论:RAW264.7细胞在20ng/mL的M-CSF 、50 ng/mL的RANKL这两种细胞因子存在的条件下经过4-6天培养可以被诱导为破骨细胞。

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  • 收稿日期:2021-01-29
  • 最后修改日期:2021-03-02
  • 录用日期:2021-03-29
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