目的 探讨去离子甲酰胺在脑腱黄瘤病基因诊断中的应用价值,同时为高GC含量DNA 片段的扩增提供方法上的参考。方法 在反应体系中不含去离子甲酰胺以及去离子甲酰胺浓度为1%~10%的情况下采用热启动PCR扩增CYP27A1基因4个高GC含量的片段,然后进行琼脂糖凝胶电泳,再用ImageJ软件分析不同去离子甲酰胺浓度下目标条带的光强度值,比较差异,最后挑选特异性扩增产物测序分析。结果 在不含去离子甲酰胺和去离子甲酰胺浓度为1%~6%的情况下,均扩增出目标片段;在不含去离子甲酰胺时,4个目标片段的扩增产物均存在非特异性带,而当去离子甲酰胺的浓度为4%~6%时,非特异性带消失。不同浓度(0~6%)条件下目标带的光强度值差异无统计学意义。特异性扩增产物经测序验证为目标片段。结论 采用热启动PCR,同时向反应体系中添加去离子甲酰胺能有效扩增出高GC含量的DNA片段,并避免非特异性带的产生,但反应体系中去离子甲酰胺的浓度宜控制在4%~6%。这一方法不仅适用于脑腱黄瘤病的致病基因—CYP27A1基因的检测,也可用于其他富含GC的基因的检测。