目的 应用CRISPR/Cas9 技术构建SIRT6基因敲除的人肺腺癌A549稳转细胞系。方法 根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则，通过生物信息学设计向导RNA（single-guide RNA sgRNA)，构建sgRNA-SIRT6质粒并包装成慢病毒感染A549细胞，使用嘌呤霉素筛选SIRT6基因敲除的A549细胞并行基因组测序鉴定，应用Western blotting检测SIRT6基因的敲除情况。结果 DNA测序结果显示sgRNA-SIRT6重组质粒构建成功，Western blotting结果显示，转染sgRNA-SIRT6重组质粒的细胞无SIRT6表达。结论 通过CRISPR/Cas9技术成功构建了SIRT6基因敲除的A549细胞系，为后续继续研究SIRT6基因在肺腺癌细胞中的作用机制和功能奠定了基础。