目的 应用CRISPR/Cas9技术构建SIRT6基因敲除的人肺腺癌A549稳转细胞系。方法 根据CRISPR/Cas9 技术靶点设计原则,通过生物信息学设计向导RNA(single-guideRNAsgRNA),构建sgRNA-SIRT6质粒并包装成慢病 毒感染A549细胞,使用嘌呤霉素筛选SIRT6基因敲除的A549细胞并行基因组测序鉴定,应用WesternBlot检测 SIRT6基因的敲除情况。结果 DNA 测序结果显示sgRNA-SIRT6重组质粒构建成功,WesternBlot结果显示,转染 sgRNA-SIRT6重组质粒的细胞无SIRT6表达。结论 通过CRISPR/Cas9技术成功构建了SIRT6基因敲除的A549细 胞系,为后续研究SIRT6基因在肺腺癌细胞中的作用机制和功能奠定了基础。