^：目的 为了观察墨旱莲(Ecliptae Herba,EHE)对THP-1源巨噬细胞炎症反应的影响,评估不同剂量的药物在体外痛风(Gout)细胞模型中的治疗效果,探究墨旱莲调控痛风炎症反应的可能机制,为后续临床用药提供新的科学依据。方法 1. 通过网络药理学及分子对接预测墨旱莲作用痛风的潜在靶点,对药物作用的潜在靶点进行KEGG富集分析预测可能的作用通道,并以此作为后续实验验证的理论依据。2.细胞实验：使用佛波酯(Phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)100pg/ml诱导人急性单核白血病细胞(THP-1)转化为巨噬细胞,并利用尿酸盐晶体(MSU)悬液终浓度200ug/ml刺激巨噬细胞,构建痛风细胞模型。使用四甲基偶氮唑蓝(MethylThiazolyl tetrazolium,MTT)法测定墨旱莲药物浓度安全范围,确定最大安全浓度为100ug/ml。将细胞分组分为6组：对照组、模型组、秋水仙碱(Colchicine)组0.5uM、墨旱莲低等浓度组25ug/ml、墨旱莲中等浓度组50ug/ml和墨旱莲高等浓度组100ug/ml。除对照组及模型组予以等量体积的磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline,PBS),其余组在MSU刺激巨噬细胞24小时后予以不同剂量墨旱莲(25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml)进行处理。并于给药24小时后收集细胞上清、细胞总蛋白及总RNA。ELISA试剂盒测量细胞上清关键炎症因子IL-1β的浓度变化； RT-PCR检测PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、NLRP3、TNF-α mRNA的表达情况；利用蛋白质印记(Western blot)验证关键通路中PI3K、AKT、mTOR、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR及NLRP3蛋白表达情况。结果 利用网络药理学筛选出墨旱莲共9个活性成分,对应160个靶点,GA对应靶点3388个,两者取交集后得到86个交集基因。分子对接结果提示墨旱莲与AKT1、TP53、TNF、IL-6等靶点亲和力较强。KEGG富集分析提示通路主要富集于PI3K/AKT、AGE-RAGE、MAPK、TNF等信号通路上,预测墨旱莲可能通过这些信号通路发挥治疗作用。MTT法检测药物最大安全浓度为100ug/ml。ELISA实验检测IL-1β含量提示：各药物治疗组能有效抑制IL-1β的分泌(P＜0.0001)。RT-qPCR结果显示：相比于对照组,痛风模型组PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、NLRP3及TNF-α mRNA的表达量均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.0005～P<0.0001))；与痛风模型组比,各药物治疗组均可抑制PI3K/AKT/mTOR/NLRP3轴及其下游炎症因子IL-1β、TNF-α的mRNA表达,差异具有统计学意义(P<0.05～P<0.0001)。WB结果提示：与对照比较,模型组中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR的比值及NLRP3蛋白表达均升高(P＜0.01)；而同模型组比较,墨旱莲各浓度组及秋水仙碱组对p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR的比值、NLRP3蛋白表达均有抑制作用(P＜0.05 ),其中墨旱莲高浓度组对通路活化抑制效果最为明显。结论 墨旱莲在痛风中的抗炎机制可能通过下调PI3K/AKT/mTOR通路,促进自噬继而影响NLRP3炎症小体的表达,从而抑制痛风的进展。